如何正确测量OD670值？

摘要： OD670的测定在微生物和细胞培养中是一个常见的实验操作，用于评估样品中的生物量或浓度，以下是详细的测量步骤和注意事项：一、准备工作1、选择合适的仪器：确保你拥有一台能够读取670...

OD670的测定在微生物和细胞培养中是一个常见的实验操作，用于评估样品中的生物量或浓度，以下是详细的测量步骤和注意事项：

一、准备工作

1、选择合适的仪器：确保你拥有一台能够读取670nm波长的分光光度计，如果使用的是酶标仪，确认其支持该波长（如DNA expert酶标仪）。

2、准备标准曲线：为了准确测定OD670值，建议先制作一条标准曲线，这通常涉及使用已知浓度的菌液或细胞悬液，通过稀释得到一系列不同浓度的样本，然后测量它们的OD670值，并绘制浓度与OD值之间的关系图。

3、校正仪器：在开始测量之前，使用去离子水或适当的缓冲液作为空白对照，对分光光度计进行调零校正。

4、稀释样品：如果预期样品的浓度较高，可能需要先进行适当稀释，以确保OD670值落在仪器的线性检测范围内。

二、测量步骤

1、取样：取适量（通常是微量级，如12ml）的待测菌液或细胞悬液，放入比色皿中。

2、设置参数：将分光光度计设置为670nm波长，并根据需要调整其他测量参数（如扫描速度、狭缝宽度等）。

3、测量OD值：将比色皿放入分光光度计中，读取并记录OD670值，如果使用酶标仪，则根据仪器说明添加适量样品至96孔板中，并设置相应参数进行测量。

4、重复测量：为了提高准确性，建议对每个样品进行多次测量，并计算平均值。

三、结果分析与应用

1、计算浓度：如果事先制作了标准曲线，可以根据测得的OD670值在曲线上查找对应的浓度，如果没有标准曲线，但知道特定OD值对应的大致浓度范围（如大肠杆菌在OD600=1时大约为10^8个/ml），可以据此估算样品浓度。

2、比较与评估：将测得的OD670值与对照组或其他实验组进行比较，以评估不同条件下的细胞生长或生物量变化。

四、注意事项

1、避免污染：在操作过程中要严格遵守无菌技术规范，避免样品受到污染。

2、控制变量：确保所有测量条件（如温度、pH值、培养基成分等）保持一致，以减少实验误差。

3、定期校准：定期对分光光度计进行校准和维护，以确保测量结果的准确性和可靠性。

五、常见问题解答

1、为什么OD670值会随时间变化？：因为细菌或细胞的生长是一个动态过程，随着时间的推移，它们的数量和活性会发生变化，从而导致OD670值的变化。

2、如何选择合适的波长？：对于大多数细菌和细胞培养物来说，600nm是常用的波长之一，但如果你的实验材料在600nm处有较强的吸收峰或干扰物质存在，可以考虑使用其他波长（如550nm、595nm等）进行测量，不过，需要注意的是，不同波长下的OD值可能不具有直接可比性。

OD670的测定是一个相对简单但需要注意细节的实验操作，通过遵循上述步骤和注意事项，可以获得准确可靠的实验结果。